RASSF1A基因甲基化——续写肺癌鉴别诊断新篇章

DNA甲基化是常见的表观遗传学现象，甲基化导致的抑癌基因失活被证实是肿瘤发生发展的主要原因。前面我们介绍过，小小的SHOX2基因甲基化即与肺癌有着千丝万缕的联系，着实令人咋舌。今天，我们的主角是肺癌另一关键基因，SHOX2的好搭档——RASSF1A基因。RASSF1A又有着什么样的甲基化故事呢？我们一起来看看……

RASSF1A基因启动子区域甲基化与肿瘤

人类肿瘤中的RASSF1A基因表达缺失是一个普遍事件，目前已在至少37种肿瘤中发现了RASSF1A启动子的甲基化失活［2-3］。

Saelee等［2］在对肝细胞癌的研究中发现了RASSF1A的高甲基化，且甲基化程度与患者的预后和生存时间显著相关。

Malpeli等［3］发现，80%(16/20)的胰腺癌组织存在RASSF1A甲基化。

此外，Nobuki在甲状腺癌TNM各期也都发现了RASSF1A超甲基化导致的表达缺失，且肿瘤的侵袭性与甲基化程度呈正相关［4-5］……

言归正传，那么RASSF1A基因在肺癌中又有什么样的表现呢？

RASSFIA基因启动子区域甲基化与肺癌发生密切相关

David G. Burbee[6]的研究发现RASSF1A基因在乳腺/肺正常上皮细胞中有表达，在非小细胞肺癌和乳腺癌细胞系中均不表达。同时RASSF1A启动子高甲基化在100%的小细胞肺癌细胞系（SCLC）、63%的非小细胞肺癌细胞系（NSCLC）、64%的乳腺癌细胞系、30%的原发性NSCLC和49%的原发性乳腺肿瘤中能被检测到，而在正常的上皮细胞中均未有检出。由此表明可见，RASSF1A是一种潜在的肿瘤抑制基因，通过启动子区域的高甲基化，在肺癌和乳腺癌中经历表观遗传失活。

M.A. vander Drift[7]对28例肺癌患者及68例对照的痰液样本进行了RASSF1A甲基化检测，检测结果显示，肺癌患者痰液脱落细胞中的RASSF1A基因甲基化水平明显高于对照组。

Qiang Lin等[8]采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）方法，对I期NSCLC组织及良性病变组织样本中的多种抑癌基因进行甲基化检测。结果表明，RASSF1A、APC、ESR1、ABCB1和HOXC9基因甲基化在I期非小细胞肺癌组织和良性病变组织中的表达具有显著性差异，且在I期非小细胞肺癌组织中的诊断灵敏度达到79.8%，特异性73.1%。

Yunfei Ma等[9]采用QD-based FRET技术对50例肺癌患者的癌组织和癌旁组织进行甲基化检测，表明癌组织样本PCDHGB6、HOXA9、RASSF1A基因启动子甲基化水平明显高于癌旁组织样本；同时将该检测方法用于无创性样本（支气管刷检样本）的检测，结果表明，RASSF1A通过与其他基因的联合检测，对组织样本的诊断灵敏度可高达92%，在支气管刷片样本中的诊断灵敏度可达到82%。

此外，具体到不同的肺癌亚型，Tomizawa等的研究显示，RASSF1A基因在腺癌（72.4%）中的甲基化频率比在鳞癌（45.1%）中更高。

RASSFIA同其它基因甲基化联合检测在肺癌诊断中的应用

从以上研究可以看出，RASSF1A基因已被证实是典型的抑癌基因，其与肺癌的发生密切相关。RASSF1A基因甲基化在肺癌，尤其是肺腺癌中具有较高的阳性率，而这恰好弥补了SHOX2基因在腺癌中灵敏度的不足。可见，RASSF1A+ SHOX2或许是个更加的策略！

可喜的是，RASSF1A与SHOX2基因的组合联检的优势不仅得到证实，而且已成功实现了商业化（人SHOX2、RASSF1A基因甲基化DNA检测，CFDA20173403354，透景生命）。与传统细胞学相比，SHOX2、RASSF1A双基因甲基化联合检测对不同病理分期、不同病理分型的肺癌诊断均有很高的检测灵敏度，在肺泡灌洗液中的检测灵敏度达到71.5-83.2%，特异性达到90.0-97.4%[11-13]。